MTT實驗
MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑藍為基礎。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環開裂，生成藍色的formazan結晶，formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N，N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。
MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候我一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
二、實驗步驟：
1、接種細胞：用含10%胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul。
2、培養細胞：同一般培養條件，培養3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養時間)。
3、呈色：培養3-5天后，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul。繼續孵育4小時，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。
4、比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。
三、注意事項
1、選擇適當的細胞接種濃度
2、避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養液進行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內殘余培養液
3、設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，最后比色以空白調零
4、MTT實驗吸光度最后要在0-0.7之間，超出這個范圍就不是直線關系，IC50是半抑制率，意思是抑制率50%的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖，然后得到50%抑制率時候的藥品濃度，就是IC50。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點線圖即可！
MTT檢測細胞增殖
MTT檢測細胞毒性
