RIP
RIP實驗
RIP技術(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結合蛋白免疫沉淀),是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術,是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具,能幫助我們發現miRNA的調節靶點。
RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體 <https://www.biomart.cn/category/10010101.htm>把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來,然后經過分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進行PCR定量分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質免疫沉淀ChIP技術的類似應用,但由于研究對象是RNA-蛋白復合物而不是DNA <https://www.biomart.cn/supply/1008010306.htm>-蛋白復合物,RIP實驗的優化條件與ChIP實驗不太相同(如復合物不需要固定,RIP反應體系中的試劑 <https://www.biomart.cn/supply/10010.htm>和抗體絕對不能含有RNA酶,抗體需經RIP實驗驗證等等)。
RIP-seq是RIP與高通量測序相結合的技術,通過免疫沉淀目標蛋白來捕獲蛋白體內結合的RNA,將捕獲的RNA進行高通量測序,分析目的蛋白在體內結合的RNA的動態變化,闡述目的蛋白對基因表達調控的分子機制。RIP不僅能研究miRNA與蛋白的作用,還可以研究lncRNA與蛋白的互作。
RIP具體實驗流程如下:

RIP實驗步驟
1. 細胞裂解
2. 磁珠準備
3. RNA結合蛋白免疫沉淀
4. RNA純化
5. RT-PCR檢測
實驗結果示例








