細(xì)胞周期
一、實驗原理
細(xì)胞在有絲分裂過程中DNA加倍（n--2n）。
二、實驗步驟（PI染色法）
1. 取1塊24孔板，接種指數(shù)生長期目的細(xì)胞：100000個/孔，設(shè)置NC對照組及實驗組，3復(fù)孔/組；
2. 取lipofilter約2.0ul，以RPMI1640培養(yǎng)基（含2% FBS）48ul混勻，室溫靜置5min；
3. 取制備的siRNA約50pmol（2ul），以RPMI1640培養(yǎng)基（含2%FBS）46ul混勻；
4. 將步驟2與3準(zhǔn)備的2管溶液混合，輕輕混勻，加入步驟1的細(xì)胞中；
5. 培養(yǎng)6h后，更換新鮮RPMI1640培養(yǎng)基（含2%FBS）500ul，繼續(xù)培養(yǎng)；
6. 培養(yǎng)48h后，1200rpm離心5min收集細(xì)胞，并以預(yù)冷PBS洗滌2次；
7. 加入預(yù)冷70%乙醇，置于4℃固定過夜；
8. 以1200rpm離心5min收集細(xì)胞，并以1mlPBS洗滌1次，加入500ul PBS（含50ug/ml PI, 100ug/ml RNaseA, 0.2% Triton X-100），4℃避光孵育30min；
9. 上機(jī)流式分析細(xì)胞周期，細(xì)胞數(shù)2-100000個，結(jié)果以Modfit分析。
三、注意事項
所有操作在冰上進(jìn)行。
流式檢測細(xì)胞周期示例圖
細(xì)胞在有絲分裂過程中DNA加倍（n--2n）。
二、實驗步驟（PI染色法）
1. 取1塊24孔板，接種指數(shù)生長期目的細(xì)胞：100000個/孔，設(shè)置NC對照組及實驗組，3復(fù)孔/組；
2. 取lipofilter約2.0ul，以RPMI1640培養(yǎng)基（含2% FBS）48ul混勻，室溫靜置5min；
3. 取制備的siRNA約50pmol（2ul），以RPMI1640培養(yǎng)基（含2%FBS）46ul混勻；
4. 將步驟2與3準(zhǔn)備的2管溶液混合，輕輕混勻，加入步驟1的細(xì)胞中；
5. 培養(yǎng)6h后，更換新鮮RPMI1640培養(yǎng)基（含2%FBS）500ul，繼續(xù)培養(yǎng)；
6. 培養(yǎng)48h后，1200rpm離心5min收集細(xì)胞，并以預(yù)冷PBS洗滌2次；
7. 加入預(yù)冷70%乙醇，置于4℃固定過夜；
8. 以1200rpm離心5min收集細(xì)胞，并以1mlPBS洗滌1次，加入500ul PBS（含50ug/ml PI, 100ug/ml RNaseA, 0.2% Triton X-100），4℃避光孵育30min；
9. 上機(jī)流式分析細(xì)胞周期，細(xì)胞數(shù)2-100000個，結(jié)果以Modfit分析。
三、注意事項
所有操作在冰上進(jìn)行。
流式檢測細(xì)胞周期示例圖
